分光光度法是指應(yīng)用
721光(guāng)度(dù)計的分(fēn)析(xī)方(fāng)法(fǎ)，具有(yǒu)靈(líng)敏(mǐn)，準確(què)，快速(sù)及選擇性好(hǎo)等特(tè)點(diǎn)。通(tōng)常(cháng)所(suǒ)測樣品(pǐn)溶液濃度下(xià)限可達10-6~10-5mol/L，適(shì)用(yòng)於測定食品(pǐn)中(zhōng)的微量(liáng)組分（如肉製(zhì)品中的(dí)亞硫(liú)酸鹽，糖果(guǒ)中的二(èr)氧化硫等(děng)）。光(guāng)度計(jì)長(cháng)時間(jiān)不用時，暗箱裏(lǐ)通常需要放(fàng)置幹燥器，用於(yú)保持暗(àn)箱室(shì)內的空氣幹燥(zào)。如果(guǒ)在預(yù)熱(rè)時(shí)將(jiāng)暗箱蓋打(dǎ)開，會使(shǐ)其(qí)空氣濕(shī)度(dù)發(fā)生變(biàn)化(huà)，影(yǐng)響測量(liáng)結(jié)果(guǒ)的準確性。
721光(guāng)度計(jì)的測量條件選擇(zé)說明(míng)：
一，顯色反應及顯色條(tiáo)件的(dí)選擇
進行比色(sè)分析(xī)或光度分(fēn)析(xī)時(shí)，首先要(yào)把(bǎ)待(dài)測(cè)組分轉(zhuǎn)變(biàn)成有(yǒu)色(sè)化(huà)合(hé)物，然(rán)後進(jìn)行比(bǐ)色或光(guāng)度(dù)測定。將待測組(zǔ)分轉變成有色化合物的(dí)反應叫顯色反(fǎn)應(yīng)，與待測組分(fēn)形成有(yǒu)色(sè)化合(hé)物的試劑(jì)稱(chēng)為(wéi)顯色(sè)劑。
1.顯色反應(yīng)的(dí)選擇
顯(xiǎn)色反(fǎn)應(yīng)分絡合反應和氧(yǎng)化還(huán)原(yuán)反(fǎn)應兩(liǎng)類(lèi)，絡(luò)合反應是最(zuì)主(zhǔ)要(yào)的(dí)顯色反應。選用的原(yuán)則是(shì)：
①選擇靈敏的顯色反(fǎn)應(yīng)。摩爾吸(xī)光(guāng)係(xì)數ε的(dí)大小(xiǎo)是顯色反應靈敏度高低(dī)的重要標(biāo)誌，因此應(yīng)當(dāng)選擇(zé)生成的(dí)有色物質的(dí)ε較大的顯(xiǎn)色(sè)反應(yīng)。一(yī)般(bān)來(lái)說(shuō)，當(dāng)ε為(wéi)104-105時(shí)，可(kě)認為該反應(yīng)靈(líng)敏度(dù)較高；
②盡(jìn)可能選(xuǎn)擇選(xuǎn)擇性好的顯(xiǎn)色(sè)劑。即(jí)顯(xiǎn)色劑僅(jǐn)與(yǔ)一個(gè)組分(fēn)或少數幾個組(zǔ)分發生顯色反應(yīng)；
③顯色劑在測定波(bō)長處無明顯(xiǎn)吸(xī)收。通(tōng)常把兩(liǎng)種有色物質最(zuì)大(dà)吸(xī)收波(bō)長(cháng)之差(chà)稱(chēng)為(wéi)對比(bǐ)度(dù)，一般(bān)要(yào)求顯(xiǎn)色劑與有色(sè)化合物的(dí)對比(bǐ)度在(zài)60nm以(yǐ)上；
④反應生(shēng)成(chéng)的有色化合物(wù)組成(chéng)恒(héng)定，化(huà)學性(xìng)質穩(wěn)定。
2.顯色條(tiáo)件的(dí)選(xuǎn)擇(zé)
吸光光(guāng)度法測定的(dí)是顯色(sè)反應(yīng)達(dá)到(dào)平(píng)衡後溶(róng)液(yè)的吸(xī)光度，因(yīn)此要得到準確(què)的結果(guǒ)，必須(xū)從(cóng)研究平(píng)衡(héng)著(zhuó)手，了解(jiě)影響(xiǎng)顯(xiǎn)色(sè)反(fǎn)應的因素，控製適(shì)當(dāng)的(dí)條(tiáo)件，使顯(xiǎn)色(sè)反應(yīng)*和(hé)穩定。
①根據溶液平(píng)衡原理，有色絡合物(wù)的(dí)穩(wěn)定(dìng)常數越大(dà)，顯色(sè)劑過量越(yuè)多，越(yuè)有利(lì)於待(dài)測(cè)組分(fēn)形成有(yǒu)色(sè)絡(luò)合物。但(dàn)是(shì)過量顯色劑的加入(rù)有時會(huì)引起(qǐ)副(fù)反(fǎn)應(yīng)，對(duì)測(cè)定(dìng)反而(ér)不(bù)利；
②酸度對顯(xiǎn)色(sè)反(fǎn)應(yīng)的影響(xiǎng)是多方麵(miàn)的(dí)。一種金屬(shǔ)離子與(yǔ)某種(zhǒng)顯色劑反應(yīng)的適(shì)宜(yí)酸度(dù)範圍(wéi)是(shì)通過實(shí)驗來確(què)定的。確(què)定的方(fāng)法(fǎ)是(shì)固定(dìng)待(dài)測組(zǔ)分及(jí)顯(xiǎn)色劑(jì)的濃度，改變溶液pH值，測(cè)定(dìng)其吸(xī)光度(dù)，作(zuò)出(chū)吸光(guāng)度(dù)-pH值(zhí)關係(xì)曲(qū)綫(xiàn)，選擇曲(qū)綫平坦部(bù)分對(duì)應的pH值作為測定條(tiáo)件；
③顯(xiǎn)色反(fǎn)應一般在室溫下(xià)進行(háng)，有的反應需(xū)要加熱，以加(jiā)速顯(xiǎn)色反應，使(shǐ)之(zhī)進行*；
④大多數顯(xiǎn)色(sè)反應需要經(jīng)過一定的時(shí)間才(cái)能(néng)完成，其長短與溫(wēn)度(dù)的(dí)高低有關，也會受到(dào)空氣(qì)的氧化(huà)或發生光(guāng)化學反(fǎn)應(yīng)使眼色顏(yán)色(sè)減弱(ruò)。因此(cǐ)必須通過實(shí)驗作出在一(yī)定(dìng)溫度下(xià)的吸光(guāng)度(dù)-時間(jiān)關(guān)係曲(qū)綫，得(dé)到適宜的顯色時(shí)間。
三，幹擾的消(xiāo)除
1.幹擾的類(lèi)型光度(dù)分析中，共存(cún)離(lí)子如(rú)本身有顏色，或(huò)與顯(xiǎn)色劑(jì)作用生成(chéng)有色化合物，都(dū)將(jiāng)幹擾測定(dìng)。
①幹(gān)擾離(lí)子本身有顏色；
②幹(gān)擾離子本身(shēn)無顏色，但(dàn)能(néng)與顯(xiǎn)色(sè)劑反(fǎn)應(yīng)生成(chéng)穩定的(dí)配(pèi)合物(wù)。若(ruò)生(shēng)成(chéng)的配(pèi)合物有(yǒu)色則(zé)直(zhí)接幹(gān)擾(rǎo)測定，若生成的配(pèi)合(hé)物無色，也降(jiàng)低(dī)了顯(xiǎn)色劑的濃度，影響被測(cè)離子與(yǔ)顯色劑的反應(yīng)，而產生誤差；
③幹擾(rǎo)離子(zǐ)與被測(cè)離子反應生成配合(hé)物(wù)或(huò)沉澱(diàn)，影(yǐng)響被測(cè)離子(zǐ)的測(cè)定。
2.消除(chú)幹擾的方法(fǎ)
①控(kòng)製(zhì)溶(róng)液(yè)酸(suān)度(dù)；
②加入(rù)掩蔽(bì)劑與幹擾離子(zǐ)形(xíng)成(chéng)更穩(wěn)定的(dí)化(huà)合(hé)物(wù)，使幹擾(rǎo)離子(zǐ)不(bù)再(zài)產生幹(gān)擾；
③裏用(yòng)參比(bǐ)溶液消除某(mǒu)些(xiē)有色(sè)幹擾離子的影響；
④選(xuǎn)擇適當的工作波(bō)長以消(xiāo)除幹(gān)擾；
⑤采(cǎi)用(yòng)適當的(dí)分離方(fāng)法。
